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必赢国际官网提取核酸DNA资料与方法

点击:154 更新时间:2019-01-11 10:16:13



     


DNA提取的经典方法:即所谓的必赢国际官网酚-氯仿提取法。因为使用两种不同的有机溶剂交替抽提更容易将蛋白除去,提取次序为酚、酚/氯仿(1:1)、氯仿,这种方法提取的DNA 纯度高、片段大、效果好,缺点是较为繁琐。


必赢国际官网提取结合二氧化硅吸附法:二氧化硅具有特异吸附核酸的特性,必赢国际官网可使细胞裂解,因此在高浓度必赢国际官网存在下,从细胞(包括细菌)或病毒颗粒中释放出来的核酸成分可以结合在二氧化硅上,利用此特性可提取血液和尿液中DNARNA。目前采用固相吸附法可以在保证结果的前提下,省去许多繁琐的操作。


TRIzol试剂提取RNA方法:TRIzol试剂必赢国际官网裂解细胞,再加入氯仿,离心后可见三层,上层为透明的水相含有RNA,中间层含DNA,下层为红色的有机相,含蛋白质。


旋转离心柱提取:旋转离心柱技术是用于微量核酸分离纯化的较为简单的方法,属于硅吸附方法的一种,市场上的离心柱各有特色。


实时荧光定量 PCR技术资料与方法:


实时荧光定量PCR的基本原理:样本核酸扩增呈指数增长在反应体系和条件完全一致的情况下,样本DNA含量与扩增产物的对数成正比。由于反应体系中的荧光染料或荧光标记物(荧光探针)与扩增产物结合发光,其荧光量与扩增产物量成正比,因此通过检测荧光量即可测定样本核酸量。通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。Ct(cycle threshold),PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数,它与模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,模板DNA量越多,荧光达阈值的循环数越少,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可做出标准曲线.因此只要获得未知样品的Ct,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数.


在实时荧光PCR技术的发展过程中,2个重要的发现起着关键的作用:①在20世纪90年代早期,TaqDNA多聚酶的5’核酸外切酶活性被发现,它能降解特异性荧光标记探针,因此使得间接检测PCR产物成为可能;②此后,荧光双标记探针的运用,使得在一个密闭的反应管中能实时监测反应全过程。


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